ATIVIDADE ANTIMICROBIANA E ANTIOXIDANTE DE POLPA E CASCA DO FRUTO DE ENDOPLEURA UCHI (HUBER) CUATREC.

RESUMO: O objetivo desse estudo foi avaliar a atividade antimicrobiana e antioxidante de polpa e casca do fruto de uxi. As amostras foram coletadas na cidade de Parintins – AM. Ao pesquisar a atividade antimicrobiana, as concentrações estudadas não apresentaram inibição do desenvolvimento microbiano, assim como para a atividade antioxidante, onde através dos extratos em DMSO, não houve inibição satisfatória do radical livre pelos métodos DPPH, ABTS e para compostos fenólicos totais. O estudo servirá como base para refinamentos direcionados ao estudo dessa temática.

Palavras-chave: Alimentos nutracêuticos. Frutos amazônicos. Sensibilidade microbiana.

ABSTRACT: The aim of this study was to evaluate the antimicrobial and antioxidant activity of uxi fruit pulp and rind. The samples were collected in the city of Parintins – AM. When investigating the antimicrobial activity, the studied concentrations did not show inhibition of microbial development, as well as the antioxidant activity, where through DMSO extracts, there was no satisfactory inhibition of free radical by DPPH, ABTS methods and for total phenolic compounds. The study will serve as a basis for refinements directed to the study of this theme.

Keywords: Nutraceutical foods. Amazon fruits. Microbial sensitivity.

1 INTRODUÇÃO

Endopleura uchi é uma espécie nativa da Amazônia Brasileira e está praticamente dispersa em todos os estados da região, com maior distribuição e frequência nos estados do Pará e Amazonas (TACON, 2012). Existem várias denominações comuns para a espécie, tais como uxi, uxi-liso, uxi verdadeiro, uxi-amarelo, uxi-pucu, pururu e cumate. O fruto é muito apreciado pelos habitantes da região, devido ao seu sabor e aroma peculiares, assim como pelo seu potencial medicinal (MAGALHÃES et al., 2007).

A casca da árvore de uxi é empregada com finalidade terapêutica, principalmente pelos habitantes da região, sendo amplamente comercializada em feiras e mercados. Ela é popularmente utilizada na forma de chá, atuando como potente anti-inflamatório (REVILLA, 2002), além de ser indicado para o tratamento de artrite, reumatismo, colesterol alto e diabetes (CORRÊA, 1984). Luna et al. (2003) determinaram a presença de bergenina, um composto cuja ação anti-inflamatória é conhecida, no extrato bruto do caule de Endopleura uchi (CAVALCANTI, 1991; REVILLA, 2002).

A bergenina é um C-glicosídeo do 4-O-metil ácido gálico, encontrada tanto no fruto como nas cascas da árvore de Endopleura uchi (MAGALHÃES et al., 2007; NUNOMURA et al., 2009). Outra atividade importante conferida à bergenina é a antimicrobiana e antioxidante, pois se mostrou bastante eficiente na inibição de crescimento de microrganismos, principalmente leveduras do gênero Candida (SILVA et al., 2009).

Diante do bioma rico em biodiversidade que é a Amazônia e da grande aceitação e importância local do Endopleura uchi, esse estudo objetivou avaliar a atividade antimicrobiana e antioxidante de polpa e casca do fruto.

2 METODOLOGIA

Os ensaios foram realizados em triplicata. Os frutos verde-maduros foram comprados no município de Parintins – AM, sendo acondicionados em sacas de polietileno e transportados para Manaus. Em seguida, foram levados para o Laboratório de Tecnologia de Produtos Agrícolas da Universidade Federal do Amazonas, onde foram realizadas as avaliações.

O material obtido foi selecionado, sanitizado, os frutos foram despolpados, separando a casca. Em seguida, foram secadas polpa e casca em estufa a 105 °C até atingir peso constante, sendo triturados, até obtenção de uma amostra com granulação fina (IAL, 2008).

Para atividade antimicrobiana foram utilizados os métodos de microdiluição em caldo, com base na metodologia de Santurio et al. (2007), com modificações, e as metodologias de difusão em ágar por realizadas conforme recomendações do CLSI (2009a). Foi utilizado como controle positivo o antimicrobiano cloranfenicol (CLSI, 2009b).

As bactérias usadas foram Enterobacter sp., E. coli, Salmonella sp., Bacillus cereus, Staphylococcus sp. e Klebsiella sp. Previamente à realização dos experimentos, as amostras bacterianas foram recuperadas em caldo Brain Heart Infusion (BHI) a 36 °C por 18 horas. Para a determinação da atividade antimicrobiana mínima, as amostras foram distribuídas em placa para cultivo celular de 24 poços, com 1 mL de BHI, para as bactérias. Todos os poços receberam 1 mL de caldo BHI e 100 uL do mix de bactérias, tendo como variável a concentração de polpa e casca de uxi diluídos separadamente em água peptonada nas concentrações: água peptonada pura (sem adição de amostra); 12,5%; 25% e 50% de amostra. O grupo controle recebeu água peptonada acrescida de antibiótico cloranfenicol 0,1%. A incubação foi a 36ºC por 24 horas.

Para a atividade antioxidante, as amostras foram secas a 70 °C em estufa. Para a obtenção do extrato, pesou-se em tubos Eppendorf 1 mg da amostra seca de polpa e casca de uxi e 1 mg de ácido gálico para controle positivo. Em cada tubo foi adicionado 1 mL de solvente DMSO (dimetilsulfóxido) obtendo-se concentração final de 1 mg/mL. Os tubos foram inseridos em equipamento de ultrassom (Unique ultracleaner 1400) durante 15 minutos, após, seguiram para centrífuga (Eppendorf centrifuge 5804 R) a 14000 rpm por 1 minuto para separar o sobrenadante. Os extratos foram analisados pelos métodos de ABTS, DPPH, e fenólicos totais.

Para o ensaio de ABTS utilizou-se uma microplaca de 96 poços (placa de Elisa). Com micropipeta retirou-se alíquotas de extrato sobrenadante. As alíquotas foram distribuídas de modo que em cada fileira correspondente às amostras resultasse na mistura de 30 µL de extrato e 270 µL de água; 30 µL de extrato e 270 µL de ABTS; 30 µL de etanol e 270 µL de água destilada para o branco. As misturas foram homogeneizadas e a microplaca seguiu para incubação durante 15 minutos para a realização da leitura de absorbância em espectrofotômetro de placas a 630 nm e realização do cálculo para obter a porcentagem de atividade antioxidante de cada amostra. Só foram consideradas as amostras que apresentaram atividade acima de 50% de atividade antioxidante.

Foi usado o método do radical DPPH (2,2-difenil-1-picrilidrazil) (RUFINO, 2007) onde foram distribuídas alíquotas de extrato solubilizado de modo que cada fileira correspondente às amostras resultasse na mistura de 30 µL de extrato e 270 µL de DPPH, para o branco foram usados 30 µL de extrato e 270 µL de etanol 96°, o padrão negativo foi preparado com 30 µL de DMSO e 270 µL de DPPH e o padrão positivo com 30 µL de ácido gálico e 270 µL de DPPH. A microplaca seguiu para incubação durante 30 minutos para posterior realização de leitura em espectrofotômetro de microplacas a 492 nm.

A concentração de fenóis totais foi quantificada por espectrofotometria, por meio da reação de oxirredução com reagente de Folin-Ciocalteu a 10%, o qual reage com as hidroxilas presentes nos polifenóis. Foram utilizados 10 µL de extrato solubilizado e 50 µL de Folin 10% para a primeira leitura em espectrofotômetro a 620 nm, após 8 minutos de incubação. Para a segunda leitura, fez-se a adição de 240 µL de Carbonato de Sódio a 94% com período de incubação de 3 minutos. Como padrão foi utilizado ácido gálico 1 mg/mL.

O experimento foi conduzido em delineamento inteiramente ao acaso no esquema fatorial, os dados foram submetidos à análise de variância (ANOVA), e foi aplicado o do teste de Tukey para comparação múltipla entre as médias, ao nível de significância de 5%, usando o software SisVar 5.3.

3 RESULTADOS E DISCUSSÃO

Os ensaios antimicrobianos para as diferentes concentrações de E. uchi contra os microrganismos testados são mostrados na Tabela 1.